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圓盤擴(kuò)散法是一種測定微生物抗菌藥物敏感性的標(biāo)準(zhǔn)方法。盡管它有優(yōu)勢，但使用圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)作為常規(guī)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)（AST）方法的一個潛在缺點(diǎn)是它相對較慢。臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所（CLSI）規(guī)定，用于圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)的接種物（直接菌落懸液的0.5McF標(biāo)準(zhǔn)）應(yīng)在非選擇性瓊脂平板上培養(yǎng)18-24小時的菌落中進(jìn)行制備。使用18-24小時生長來準(zhǔn)備初始測試接種物的建議，在很大程度上是基于人類工作日的規(guī)范，以及歷史上大多數(shù)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室只在“白班”期間工作的情況。因此，建立培養(yǎng)物或傳代培養(yǎng)過夜，然后在第二天進(jìn)行AST。隨著微生物學(xué)檢測規(guī)范的變化，是時候在建立AST之前重新檢查18小時培養(yǎng)的需要了。減少測試準(zhǔn)備的時間間隔將是一種相對簡單和非常便宜的方法，可以更快地提供AST結(jié)果，并且可能非常適合于陽性血培養(yǎng)的AST檢測，而得到結(jié)果的時間是至關(guān)重要的。

因此推薦這篇文章給大家，希望能對大家有所幫助。

Stop Waiting for Tomorrow: Disk Diffusion Performed on Early Growth Is an Accurate Method for Antimicrobial Susceptibility Testing with Reduced Turnaround Time

內(nèi)容

摘要：圓盤擴(kuò)散法是一種緩慢但可靠的測定微生物抗菌藥物敏感性的標(biāo)準(zhǔn)方法。我們的目標(biāo)是通過減少培養(yǎng)物在建立圓盤擴(kuò)散測試前的培養(yǎng)時間，來提高這種方法的周轉(zhuǎn)時間。初始方法的開發(fā)，選擇臨床分離菌株（n=13）和質(zhì)量控制菌株（n=8）的細(xì)菌接種于血瓊脂，在35℃培養(yǎng)6、10或24小時，使用一組臨床適當(dāng)?shù)目咕幬镞M(jìn)行圓盤擴(kuò)散測試。圓盤擴(kuò)散區(qū)大小采用臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所（CLSI）指南進(jìn)行指導(dǎo)。與標(biāo)準(zhǔn)的24小時培養(yǎng)相比，前期的6小時生長有1.3%的主要錯誤（MEs）和1.9%的非常嚴(yán)重的錯誤（VMEs），而10小時生長產(chǎn)生0.7%的MEs，沒有VMEs。在6h（96.7%）和10h（96.7%）的生長過程中，與標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)的分類一致性相似。從6h（r² = 0.98）和10h（r² = 0.99）生長的抑制區(qū)大小與標(biāo)準(zhǔn)條件下的結(jié)果密切相關(guān)。基于這些結(jié)果，作者在優(yōu)化條件下（6h生長）進(jìn)行了圓盤擴(kuò)散，使用了另外100株臨床分離株，顯示了高水平的分類一致性（950次測量中的917次[96.5%]；95%CI，95.2-97.5%），以及沒有VMEs或MEs。與標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)相比，使用早期生長進(jìn)行圓盤擴(kuò)散測試是一種簡單而準(zhǔn)確的敏感性測試方法，可以減少18小時，且不需要額外的供應(yīng)成本或設(shè)備儀器。

結(jié)果：

分離生長：結(jié)果顯示血瓊脂平板培養(yǎng)6小時缺乏增長，主要是在第一個或兩個象限，而血瓊脂平板培養(yǎng)10h顯示在所有四個象限的增長，以及大多數(shù)情況下存在單獨(dú)菌落。盡管6小時生長有限，但6小時平板上有足夠的細(xì)菌，使0.5MCF標(biāo)準(zhǔn)懸液用于所有603個圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)。

不同方法之間的分類一致性:所有603個EDD6試驗(yàn)、603個EDD10試驗(yàn)和603個St24試驗(yàn)均可產(chǎn)生圓盤擴(kuò)散區(qū)。三分之一（366項(xiàng)中的122項(xiàng)）的臨床試驗(yàn)在標(biāo)準(zhǔn)條件下對所評估的抗菌素具有耐藥性。對早期和標(biāo)準(zhǔn)生長的AST結(jié)果進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，603項(xiàng)試驗(yàn)中有583項(xiàng)（96.7%；95%CI，94.9-97.8）在EDD6和St24之間一致，EDD10和St24之間的試驗(yàn)次數(shù)（603中583項(xiàng)）一致（表2和3）。EDD6有1.9%的VME（95%CI，0.5-5.6%）和1.3%的ME (95% CI，0.6-2.9%）與St24相比（表2），而EDD10沒有VME和0.7%的ME（95%CI，0.2-1.9%）（表3）。EDD6的三個VME結(jié)果包括EDD6和St24對金黃色葡萄球菌的抑制有1mm的差異，EDD6和St24重復(fù)對陰溝腸桿菌的抑制有4-和6-mm的差異。

不同方法之間的定量一致性：早期圓盤擴(kuò)散與標(biāo)準(zhǔn)盤擴(kuò)散的比較（線性回歸）顯示，EDD6（r ² = 0.98）和EDD10（r ² = 0.99）與早期生長的圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)高度相關(guān)（圖2A至C）。布蘭德阿爾特曼分析（圖2D)顯示，與標(biāo)準(zhǔn)圓盤擴(kuò)散（EDD - St24）相比，EDD6（平均差-0.46 mm；95% CI，-0.56至-0.35mm)和EDD10（平均差-0.42 mm；95% CI，-0.51至-0.33）的偏差相對較小。如圖3所示，早期和標(biāo)準(zhǔn)的圓盤擴(kuò)散方法之間的差異是由于屎腸桿菌中EDD6的抗菌區(qū)尺寸較?。ㄆ骄?/span>-0.51 mm；95%CI，-0.81至-0.22)和金黃色葡萄球菌分離株（平均差-1.14 mm；95%CI，-1.33至-0.96)，以及EDD10的抗菌區(qū)大?。ㄆ骄?/span>-0.70 mm；95%CI，-0.90至-0.50)，糞腸桿菌（平均差-0.22 mm；95%CI，-0.40至-0.04)和金黃色葡萄球菌分離株（平均差-0.81 mm；95%CI，-0.96至-0.65)。

當(dāng)通過細(xì)菌種類評估結(jié)果時，EDD6、EDD10和St24之間的中位抗菌抑制作用的差異不超過1-mm。值得注意的是，當(dāng)將EDD6或EDD10與標(biāo)準(zhǔn)圓盤擴(kuò)散進(jìn)行比較時，7種細(xì)菌中有5種具有相同的中位區(qū)大小（圖3）。與St24相比，EDD6生長的69個AST結(jié)果中有67個（97%）與EDD10中的66個（96%）分離藥物組合的區(qū)域大小在1mm內(nèi)一致。

用優(yōu)化的方法評價臨床菌株：基于這種初始方法優(yōu)化的結(jié)果，作者試圖評估100個臨床相關(guān)分離株的6小時早期圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，并使用適當(dāng)?shù)目咕姘暹M(jìn)行測試。綜合結(jié)果，采用標(biāo)準(zhǔn)方法（St24）檢測的360種革蘭陽性分離藥物組合中有38.1%耐藥，590種革蘭陰性分離藥物組合中有41.9%耐藥（St24法）。比較早期（EDD6）和標(biāo)準(zhǔn)增長（St24）的AST結(jié)果，發(fā)現(xiàn)高水平的分類一致性（950/917[965.5%]；95% CI，95.2至95.5%），以及低水平的非常重大誤差（0/306[0%]；95% CI，0至1.2%)，主要誤差（0/644[0%]；95% CI，0至0.6%)，還有一些小錯誤(950個中的33個[3.5%]；95% CI，2.5-4.8%），如圖4（抗菌區(qū)大小相對于敏感性斷點(diǎn))和表4（早期和標(biāo)準(zhǔn)生長之間的分類一致性）所示。

對88種分離藥物組合的區(qū)域大小進(jìn)行了比較，88種組合中85組（96.6%）EDD6與ST24平均差異之間不到2毫米，只有三個隔離藥物組合有2毫米的差異，包括氯霉素-VRE，呋喃妥因和對紅霉素-甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌（MSSA），平均差異-2、-2和2.5毫米（EDD6-St24）。

討論

更快的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)可以提供更好的臨床結(jié)果和改善抗菌藥物管理。這種對速度的需求促使了最新的發(fā)展，包括快速表型和遺傳易感性檢測，24小時微生物實(shí)驗(yàn)室的人員配備，以及全實(shí)驗(yàn)室自動化。盡管有了這些進(jìn)展，仍然迫切需要一種可靠、低成本的AST方法，該方法可以比傳統(tǒng)方法更快地提供結(jié)果，并可以應(yīng)用在具有各種資源的實(shí)驗(yàn)室中。在此，作者描述了一種簡單而經(jīng)濟(jì)有效的對圓盤擴(kuò)散測試的修改，它有可能加快AST結(jié)果的報告。

雖然縮短早期生長時間和標(biāo)準(zhǔn)圓盤擴(kuò)散方法的檢測結(jié)果高度一致，但作者觀察到與St24相比，EDD偏?。ㄐ∮?/span>0.5 mm）。但總的來說，EDD6和EDD10的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)高度一致。早期的圓盤擴(kuò)散測試在一系列微生物、抗生素類別和耐藥性模式上表現(xiàn)良好。測試參數(shù)的多樣性可以通過生物體的選擇來證明，其中包括常規(guī)QC菌株和更具挑戰(zhàn)性的臨床分離株，在已建立的斷點(diǎn)附近有抑制區(qū)。

該方法也顯示了較低的技術(shù)故障率。所有來自EDD6、EDD10和St24的重復(fù)都是可評估的，沒有技術(shù)失敗?；谶@些結(jié)果（對21株分離株和適當(dāng)?shù)目股剡M(jìn)行EDD6和EDD10檢測），作者對另外100株臨床分離株進(jìn)行了圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)，分別培養(yǎng)6小時（EDD6）進(jìn)行圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)。采用優(yōu)化的方法進(jìn)行的早期圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)結(jié)果沒有VME或ME，與標(biāo)準(zhǔn)24小時培養(yǎng)的結(jié)果分類一致96.5%，這表明這是一種準(zhǔn)確的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)方法，減少了周轉(zhuǎn)時間。

圓盤擴(kuò)散試驗(yàn)是一種簡單、可靠性高的藥敏檢測方法，被廣泛認(rèn)為是AST的標(biāo)準(zhǔn)方法。EDD提供了一種改進(jìn)圓盤擴(kuò)散周轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)的方法，同時保留了這種眾所周知的方法的有益屬性。建議未來的工作旨在評估EDD納入臨床工作流程時的性能。

總之，使用早期生長進(jìn)行圓盤擴(kuò)散測試是一種簡單而準(zhǔn)確的抗菌藥物敏感性測試方法，可以減少檢測時間多達(dá)18小時，同時對檢測方法不增加額外的成本。這種方法應(yīng)被納入全實(shí)驗(yàn)室自動化或常規(guī)安排第二班和第三班的實(shí)驗(yàn)室所考慮。